化妆品为什么需要测化学原料荧光素渗漏试验，目的为了预测和评价化妆品用水溶性化学原料对眼睛是否具有强刺激性或腐蚀性。

防腐剂厂家以下具体介绍化妆品用化学原料荧光素渗漏试验步骤：

一、细胞建模

1.细胞复苏

2. 接种细胞于含10%胎牛血清且不含酚红的DMEM-F12（1：1）混合培养液中，每天观察细胞生长状态，稳定传2代后准备建模。

3.用胰酶-EDTA（0.05% w/v胰酶，0.02% w/v EDTA）消化细胞，收集细胞于离心管中，800～1000 rmp/min离心5 min，重新悬浮细胞于培养液中，调整细胞浓度为4×10⁵ 个/mL。

4.取无菌24孔板每孔加入400 μL新鲜培养基，将嵌入型细胞培养皿transwell（嵌入型细胞培养皿厚度为80～150 μm，孔径约0.45μm）放入24孔板中，注意避免气泡。其中21个transwell内室中加入400μL 细胞悬液（终浓度约1.6×10⁵个/transwell），剩余3个transwell中加入同体积的培养液。将24孔板放入37 ℃ 5%CO₂培养箱中培养96 h 后，检测前一天transwell内外换新鲜培养液。

二、染毒和清洗

以400 μL/孔预热至37 ℃的HBSS（无酚红）清洗transwell内室2遍。以200 μL/孔的受试物浓度梯度溶液进行染毒，染毒时间为1 min，每个浓度做3个复孔，染毒后以400 μL/孔预热至37 ℃的HBSS（无酚红）清洗transwell内室2遍。同时空白对照、阴性对照和阳性对照做相应的处理。

以上是化妆品用化学原料荧光素渗漏试验步骤。

本文转自国家药品监督管理局官网